表面活性蛋白D高表达对脂多糖诱导人肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响

摘要

目的研究表面活性蛋白D（SP-D）高表达对脂多糖诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达的影响及其机制。方法间接免疫荧光、Western印迹及RT-PCR检测SP-D蛋白及mRNA在HK-2细胞内的表达。脂多糖在不同浓度（0、0.1、1、2、5、10 mg/L）作用8 h及5 mg/L脂多糖作用HK-2细胞不同时间（0、2、4、8、16、24 h）,采用Western印迹和实时定量PCR检测SP-D表达,ELISA和实时定量PCR检测MCP-1表达。脂质体转染法将pEE14-hSP-D质粒转染HK-2细胞,筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测转染后SP-D蛋白表达。采用5 mg/L脂多糖刺激pEE14-hSP-D稳定转染的HK-2细胞8 h,ELISA和实时定量PCR检测HK-2细胞MCP-1表达。结果HK-2细胞表达SP-D。脂多糖可诱导MCP-1 mRNA及蛋白表达显著增高（P＜0.05）;并可诱导SP-D mRNA及蛋白表达显著降低（P＜0.05）。转染pEE14-hSP-D质粒使HK-2细胞高表达SP-D,并可下调脂多糖诱导的MCP-1表达（P＜0.01）。结论SP-D可通过下调脂多糖诱导的HK-2细胞MCP-1的表达,从而在肾脏炎性反应中起重要作用。