新生隐球菌基因组DNA不同抽提方法的比较

摘要

目的 DNA是进行分子生物学研究的重要基础.在本研究中,我们建立了2种简单快速抽提基因组DNA的方法并可用作PCR扩增的模板.通过比较4种不同的DNA抽提方法以确定哪种更适合进行下一步的基因分析.方法 这4种方法是:玻璃珠法,酶法,3%SDS法和氯化苄法.玻璃珠法是用玻璃珠在混漩器上剧烈振荡破碎细胞壁;3%SDS法是将细胞在含10 mmol/L DIT的3%SDS溶液中加热,然后用5 mmol/L Kac和异丙醇抽提,DNA的产量通过A260测定.结果 3%SDS溶解法、经典酶法、玻璃珠法和氯化苄法的DNA产量分别为0.415 4±0.036 7、0.848 4±0.075 6、1.263 6±0.2040、0.407 0±0.033 9(g/L×108 CFU/mL).结论 玻璃珠法是最敏感、重复性好、简单、费用合理的抽提方法.