B7-H3分子对肾透明细胞癌细胞系786-O转移作用机制的研究

摘要

目的探讨B7-H3分子对肾透明细胞癌细胞系786-O转移的影响。方法慢病毒感染法构建B7-H3低表达稳转细胞系（shB7-H3）和阴性对照组（shNC）。RT-qPCR、流式细胞术及Western blot试验验证慢病毒转染效率;CCK-8法检测shNC组和shB7-H3组786-O细胞增殖差异;流式细胞术检测两组细胞周期变化;细胞划痕和Transwell试验测定两组细胞迁移和侵袭能力差异;Western blot试验检测上皮-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）相关标志蛋白表达变化;流式细胞术和RT-qPCR检测两组细胞趋化因子及其受体表达变化;Transwell试验检测抗CCL4阻断性抗体对细胞迁移和侵袭能力的影响。结果流式细胞术检测发现人肾透明细胞癌细胞系786-O高表达B7-H3分子, 慢病毒转染法成功构建B7-H3低表达细胞株（786-O-shB7-H3）和对照组细胞株（786-O-shNC）。B7-H3分子对786-O细胞增殖活性没有明显影响, shB7-H3和shNC两组细胞周期差异无统计学意义。与shNC组比较, shB7-H3组细胞迁移和侵袭能力降低, EMT相关标志蛋白（纤维连接蛋白和N-cadherin）表达水平降低, E-cadherin表达水平升高。shB7-H3组细胞中趋化因子CCL4及其受体CCR5表达低于shNC组, 加入抗CCL4抗体阻断剂后shNC组细胞迁移和侵袭能力降低, 而shB7-H3组无明显变化。结论敲低B7-H3分子表达对786-O细胞的增殖水平无明显影响, 但可以影响786-O细胞的EMT进程, 降低肿瘤迁移和侵袭能力, 从而抑制肿瘤进展。