目的 探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶4（PAD4）在抗β2GP1/β2GP1复合物诱导中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）形成中的作用。方法 分离健康人外周血中性粒细胞与抗β2GP1/β2GP1复合物（100 μg/ml）共孵育一定时间,Western blot检测细胞PAD4表达；进一步采用PAD4抑制剂Cl-amidine（10 μmol/L）预处理中性粒细胞,Western blot检测细胞瓜氨酸化组蛋白3（CitH3）蛋白质表达,ELISA检测细胞培养上清中髓过氧化物酶（MPO）-DNA相对含量。下腔静脉狭窄法建立APS小鼠血栓模型,并通过腹腔注射Cl-amidine（50 mg/kg）进行干预,Western blot检测血浆中CitH3蛋白质表达,荧光染色法检测血浆中循环游离DNA（cf-DNA）浓度,取下腔静脉血栓称其重量,观察Cl-amidine能否抑制APS-IgG诱导的NETs和血栓形成。组间差异采用t检验或单因素方差分析。结果 抗β2GP1/β2GP1复合物能够显著下调细胞质中PAD4蛋白质表达水平[（3.67±0.32） vs （1.47±0.19）,t＝10.22,P＆0.05],并使细胞核内PAD4蛋白质含量升高[（0.57±0.19） vs （2.97±0.31）,t＝11.49,P＆0.05]；Cl-amidine能显著抑制抗β2GP1/β2GP1复合物诱导的中性粒细胞CitH3蛋白质表达[（2.46±0.47） vs （0.46±0.13）,t＝12.24,P＆0.01],明显减少培养上清中MPO-DNA含量[（4.09±0.94） vs （2.80±0.57）,t＝4.23,P＆0.05]。在体内试验中,Cl-amidine能显著抑制APS小鼠血浆中CitH3蛋白质表达[（3.97±0.56） vs （1.09±0.45）,t＝11.83,P＆0.01],明显降低APS小鼠血浆中cf-DNA浓度[（2 685.0±735.8） vs （1 784.0±577.0）,t＝3.93,P＆0.05]；与对照组EAPS小鼠相比,经Cl-amidine预处理的APS小鼠血栓形成明显减小[（8.22±3.06） vs （4.89±1.90）,t＝2.27,P＆0.05]。结论 PAD4参与了抗β2GP1/β2GP1复合物诱导的NETs形成,其可能在APS血栓形成中发挥重要作用。
展开▼
