pSFV1载体系统的改造

摘要

目的获得具有多种稀有酶位点和CMV IE增强子/启动子及SV40晚期poly(A)加尾信号的pSFV1载体系统. 方法首先将含有多种稀有酶位点的人工接头插入到pSFV1的BamHⅠ和SmaⅠ位点(获得的载体称为mpSFV1),然后在mpSFV1和辅助载体Helper2的SpeⅠ和SphⅠ位点分别插入SV40晚期poly(A)加尾信号和CMV IE增强子/启动子序列.以间接免疫荧光法检测构建的表达载体mpSFV1-A-CMV表达登革2型病毒PrME基因的效率,并用RT-PCR法鉴定辅助载体Helper2-A-CMV包装形成重组病毒的能力. 结果经PCR和酶切鉴定证明,接头、CMV IE增强子/启动子序列和SV40晚期poly(A)加尾信号序列均已导入pSFV1载体系统中;测序结果也与已知序列一致.间接免疫荧光法证明,PrME蛋白在BHK21细胞中获得了表达,同时,改造后的辅助载体也具有包装形成重组病毒的能力. 结论已将以RNA为基础的pSFV1载体系统构建成以DNA为基础的表达载体系统.