赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA的表达及其促细胞增殖效应

摘要

目的在大肠杆菌中表达赖型钩端螺旋体毒力相关蛋白InvA,并观察该蛋白对ANA-1细胞的增殖作用. 方法将invA基因克隆于pET32a(+)载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达带组氨酸标签的Trx-InvA融合蛋白,经亲和层析获得纯化Trx-InvA蛋白.以不同浓度的Trx-InvA融合蛋白作用于ANA-1细胞,以四氮唑复合物[2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-sulfophenyl)-5-[(Phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazoium hydrixide,XTT]法检测细胞增殖的变化,分析InvA蛋白的细胞功能. 结果成功构建pETINVA原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达了相对分子质量(Mr)约为35×103的Trx-InvA融合蛋白,该蛋白能促进ANA-1细胞的增殖. 结论表达并纯化的Trx-InvA融合蛋白具有促进细胞增殖的作用.