小鼠CD4+记忆性T淋巴细胞的产生、纯化、鉴定及皮肤移植的检测

摘要

目的建立CD4+记忆T细胞（memory T lymphocytes,Tm）的免疫磁珠分离方法,并检测其体外部分功能。方法借助小鼠皮肤移植模型,制备受鼠脾细胞悬液,运用免疫磁珠方法分离CD4+ Tm,用台盼蓝染色法和流式细胞仪检测分选所得细胞的活性和纯度,并在体外用ELISPOT技术检测其不同抗原刺激时IFN-γ活性分泌频数。结果小鼠皮肤移植皮片平均存活时间为（13.6±0.9） d;分离所得CD4+ Tm的活细胞百分率为（98.4±0.7）%;流式细胞术检测表型,其中CD4+ CD8-细胞比例占（96.06±2.49）%,CD44+ CD62L-细胞比例占（94.13±2.36）%,CD4+ CCR7-细胞比例占（96.39±1.93）%;在无刺激物作用或者大鼠脾细胞、供体脾细胞、刀豆素A等刺激物作用时,IFN-γ活性分泌频数分别为3±1、6±3、339±14、108±9个/10~4,差异有统计学意义。结论通过小鼠皮肤移植模型及免疫磁性分离技术,可制备高纯度无菌的CD4+ Tm,其细胞活力不受影响,作用具有良好的供体特异性。这为深入研究Tm在移植物免疫方面的作用提供了技术资料。