肠道病毒71型病毒样颗粒在汉逊酵母中的表达

摘要

目的应用汉逊酵母表达系统进行肠道病毒71型（EV71）病毒样颗粒（VLP）的表达。方法将经过汉逊酵母密码子优化的人EV71的P1和3CD基因片段克隆到汉逊酵母表达载体PMV上,获得重组表达质粒PMV-P1-3CD,转化汉逊酵母宿主菌AU0501,PCR方法及稳定传代培养筛选整合P1和3CD基因的重组菌株。重组菌种接种在含有1%甲醇的培养基中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot检测。挑选优胜表达菌株进行30 L发酵罐发酵培养,发酵产物经过粗略纯化后进行电镜分析。结果筛选获得EV71重组表达菌株;SDS-PAGE检测结果显示在相对分子质量（Mr）为26×10~3、33×10~3、35×10~3处有明显的VP3、VP1、VP0蛋白条带,Mr大小与预期的目的蛋白大小一致;Western blot检测结果显示表达产物与EV71-VP1单克隆抗体在Mr为33×10~3处有较为明显的VP1反应条带,表达产物具有良好的免疫反应性;表达菌株发酵表达量可达200 mg/L,电镜分析可见24~30 nm的VLP,且颗粒结构完好。结论应用汉逊酵母表达系统成功表达了EV71VLP,为今后研制EV71 VLP疫苗奠定基础。