人季节性流感病毒H1、H3、B型PCR-ELISA分型检测方法的建立及应用

摘要

目的建立快捷灵敏的季节性流感病毒PCR-ELISA检测技术。方法根据甲型流感病毒M基因（M）、H1和H3亚型的HA基因（H1-HA、H3-HA）、乙型流感病毒的NS基因（B-NS）保守序列设计引物探针, 通过生物素与地高辛的特异性标记, 最后通过酶联免疫吸附试验（ELISA）判断PCR扩增的有无。结果 M、H1、H3、B-NS四个基因片段所能检测的最低拷贝数分别为:1.43×103、8.67×102、3.86×103、5.45×103拷贝/μl, 其敏感度比普通PCR扩增提高了10倍, 且不同流感病毒亚型之间、不同种属病毒之间均不存在交叉反应现象。另外还检测了104份临床标本, 本文所建立的PCR-ELISA方法的检测结果与细胞培养完全一致。结论本文通过特异性和敏感性实验显示此方法灵敏度高, 特异性强, 且操作简单, 可以广泛地应用于流感病毒的实验室检测。