构建HBV同源启动子断裂X基因质粒

摘要

由乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）引起的重症肝炎、肝硬化或肝癌而死亡者高达１００～２００万例／年。在自然宿主中仅有少数几种病毒与场症有关，ＨＢＸ蛋白致癌性较强。ＨＢＶＸ基因是ＨＢＶ４个开架阅读框中最小的一个，对应于１３７４～１８３８位核苷酸之间，编码１５４个氨基酸。该基因表达的ＨＢＸ蛋白为一种反式激活子。ＨＣＣ病人的肿瘤和肿瘤周围组织常可发现断裂Ｘ基因和完整长度Ｘ基因。本文报道利用含有同源启动子质粒ｐ４ａｌｘ和含有断裂ｘ基因质粒ｐＭＴ９Ｔ４１Ａ均建含有同源启动子的中间质粒ｐＸＰ再加上断裂Ｘ基因构建含有同源启动和断裂Ｘ基因的质粒ｐＸＰ９Ｔ４１Ａ，约４．１ｋｂ。并用该质粒与ＳＶ４０Ｌｕｃ共同转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，表明构建的质粒ｐＸＰ９Ｔ４１Ａ能表达ＨＢＸ蛋白，并与含异源启动子和断裂Ｘ基因的质粒ｐＭＴ９Ｔ４１Ａ的反式激活作用相类似。含有同源启动子更类似于ＨＢＶ感染者体内状况。进一步研究该质粒转基因动物中可能的病理变化与肿瘤抑制因子Ｐ５３蛋白的相互关系，与宿主细胞的整合以及细胞转化能力等，可望为ＨＣＣ的发病机理的研究提供一种有用的工具。