双链RNA和咪喹莫特联合刺激的协同作用研究

摘要

目的研究双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）和咪喹莫特联合刺激是否具有协同效应.方法在Toll样受体3（TLR3）的特异性刺激剂dsRNA、TLR7的特异性刺激剂咪唪莫特（R837）单独刺激或二者联合刺激条件下,检测BALB/c×C57BL/6和NH细胞缺陷的非肥胖型糖尿病（NOD）×C57BL/6小鼠胚胎吸收率.采用小鼠体内注射上述刺激剂的方法 ,流式细胞术检测子宫CD45+细胞内细胞因子表达水平.为进一步鉴定CD45+细胞身份,在体外培养系统中采用dsRNA和咪喹莫特刺激胎盘和底蜕膜来源的子官CD3+T细胞和CD49b+NK细胞,并检测细胞内细胞因子表达水平.采用丝裂原激活的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）抑制剂SP600125和PD98059阻断细胞因子表达水平的增加.结果此 dsRNA和咪喹莫特联合刺激对胚胎吸收率的增高具有协同作用,同时对CD45+细胞内TNF-α和IFN-γ的表达增强具有协同刺激作用.进一步细胞鉴定研究显示,虽然在BALB/c小鼠CD3+细胞和CD49b+NK细胞中均可发现这种协同效应,但是在NOD小鼠,这种细胞因子水平的增高应主要归因于CD3+T细胞,因为在CD49b+NK细胞不显示这种细胞因子增高趋势.上述刺激剂合用的协同效应町部分地被JNK（Jun N-terminal kinase）MAPK抑制剂SP600125阻断,而几乎被ERK（extracellular signal.regulated kinase）MAPK抑制剂PD98059所完全阻断.结论增强的TLR3和TLR7联合信号可能是通过NOD小鼠Th1型T细胞,而不是NK细胞所传导.ERK MAPK途径可能在TLR3和TLR7参与的细胞信息传递过程中发挥关键性作用。