质粒介导的RNAi技术对大鼠CⅡTA和MHCⅡ基因表达抑制的检测

摘要

目的研究应用质粒介导的RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术对大鼠MHC Ⅱ类分子反式激活因子（MHCclass Ⅱ transactivator,C Ⅱ TA）和MHC Ⅱ基因表达的抑制作用.方法根据大鼠CⅡTA基因信息,设计合成3条短发夹状RNA（short hairpin RNA,shRNA）并构建质粒载体,于体外转染大鼠骨髓源树突状细胞（DC）及体内转染大鼠脾脏,采用实时定量RT-PCR技术检测转染后DC和脾脏的C Ⅱ TA及MHCⅡ的mRNA表达变化,流式细胞术检测转染后MHCⅡ蛋白表达变化.结果成功构建shRNA质粒载体,3个shRNA质粒转染组的DC和脾脏转染后的CⅡTA和MHC Ⅱ的mRNA表达水平及MHC Ⅱ抗原表达水平均明显减低（P＆0.01）,其中第1条shRNA的质粒转染组抑制效果最侍,C ⅡTA与MHCⅡ基因表达呈正相关.结论应用C Ⅱ TA靶向shRNA质粒载体在体内外均能显著抑制C Ⅱ TA和MHC Ⅱ基因表达,为进一步基因治疗研究奠定实验基础。