应用反向PCR方法进行YAC末端的分离分析

摘要

目的 建立有效分离酵母人工染色体(yeast artificial chromosome,YAC)末端的方法.方法 根据反向PCR原理,在分析YAC载体DNA序列的基础上,选用YAC载体上存在切点的限制性内切酶酶解YAC DNA,通过连接反应形成环状DNA分子,再用与YAC载体两末端互补的引物进行扩增,扩增产物经进一步纯化后测序,即可得到YAC末端的序列.结果 用反向PCR方法,分别从776E2、964C5、11D8和8D1共4个YAC分离得到各自的左右末端.结论 该方法简便、有效,适用于所有的YAC克隆.