单细胞电泳用于检测人精子DNA链断裂

摘要

目的 引进精子单细胞凝胶电泳(single-cell gel electropherosis,SCGE)实验方法,用以检测人类精子DNA链断裂.方法 载有精子和凝胶的玻片首先在pH10的弱碱性裂解液中作用1 h,精子核分别用10 mmol/L二硫苏糖醇处理1 h,10 μg/ml RNA酶处理4 h,200μg/ml蛋白酶K处理15 h.精子核用15μg/ml的EB染色5 min.计数彗星细胞百分率,并用本试验室建立的精子SCGE实验方法观察H2O2在体外条件下对正常精子细胞DNA的损伤作用.结果 8名受试彗星精子细胞百分率为2%～38%,不同个体之间有明显差异.精子细胞在1.0 mmol/L H2O2的PBS中孵育0.5～4 h,彗星细胞百分率显著增加,并有明显的时间-效应趋势.精子细胞在0.125～1.000 mmol/L H2O2的PBS中孵育1 h,彗星细胞百分率显著增加,并有明显的剂量-效应关系.结论 SCGE可用于检测人类精子细胞DNA链断裂,使用这一实验方法成功地检测出H2O2引起的人类精子DNA损伤.