基于斑马鱼胚胎表型的Wnt/β-catenin信号通路小分子抑制剂的筛选方法

摘要

目的利用模式生物斑马鱼,建立1种基于胚胎表型的直观、快速的小分子抑制剂筛选方法,从而高效筛选和评价小分子化合物对体内Wnt/β-catenin信号通路的抑制活性。方法Wnt/β-catenin信号通路激活剂6-bromoindirubin-3-oxime(BIO)处理受精后6 h斑马鱼胚胎,检测胚胎48 hpf眼睛发育情况;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测48 hpf胚胎心脏不对称发育情况;小分子化合物与BIO共同处理6 hpf斑马鱼胚胎,检测斑马鱼眼部表型营救情况。结果Wnt/β-catenin信号通路激活剂BIO处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎出现“无眼”表型;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂iCRT3、PNU-74654处理斑马鱼胚胎,48 hpf胚胎心脏左右不对称发育出现异常;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939、PNU-74654分别与BIO共同处理斑马鱼胚胎,48 hpf能够显著营救由BIO激活所导致斑马鱼的眼部缺失表型。已知Wnt/β-catenin信号通路异常激活与诸多癌症密切相关,实验为筛选具有靶向抑癌作用的先导化合物提供了高效、可靠、快速的筛选方法。