微小RNA-320a和钠氢交换调控因子1在肝细胞癌中的表达及机制

摘要

目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-320a和钠氢交换调控因子1(Na+/H+exchanger regulatory factor 1,NHERF1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及机制.方法 收集首都医科大学附属北京佑安医院2015年1月至2016年1月经手术治疗的HCC患者肝癌组织及癌旁组织.采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测miR-320a和NHERFl在HCC组织、癌旁组织、HCC细胞株Bel-7402和正常肝细胞株HL-7702中的表达.将体外培养的Bel-7402细胞分为对照组、空白组和miR-320a转染组,空白组中仅加入2 ml全培养基;对照组加入2 ml空载体质粒;miR-320a组将稀释的miR-320a混合液加入到完全养基中,最终体积为2 ml;采用RT-PCR检测Bel-7402细胞中miR-320a、NHERF1及β-catenin的表达,采用流式细胞术检测Bel-7402细胞的凋亡,采用Transwell检测Bel-7402细胞迁移侵袭能力.结果 miR-320a(0.51±0.01 vs 0.83±0.02)和NHERFl(0.78±0.02 vs 1.42±0.05)在肝癌组织中的表达均显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(t值分别为-80.25、-68.05,P均<0.001).miR-320a(0.75±0.03 vs 0.81±0.04)和NHERFl(0.79±0.05 vs 1.58±0.05)在Bel-7402细胞中的相对表达量均显著低于HL-7702,差异有统计学意义(t=-2.73,P=0.021,t=-27.60,P<0.001).对照组、空白组和miR-320a转染组在Bel-7402细胞中miR-320a相对表达量分别为0.77±0.04、0.79±0.05和1.28±0.07,差异有统计学意义(H=11.66,P=0.003),miR-320a转染组显著高于对照组和空白组(H值分别为8.308、8.308,P值分别为0.004、0.004).对照组、空白组和miR-320a转染组Bel-7402细胞中NHERFl相对表达量分别为0.82±0.04、0.70±0.04和1.46±0.06,差异有统计学意义(H=15.17,P=0.001),miR-320a转染组显著高于对照组和空白组(H值分别为8.337、8.308,P值分别为0.004、0.004).空白组、对照组和miR-320a转染组Bel-7402细胞凋亡率分别为11.2％、11.4％、32.5％,差异有统计学意义(χ2=9263.95,P<0.001).其中miR-320a转染组显著高于空白组和对照组(χ2值分别为7508.35、5100.96,P均<0.001),空白组和对照组间差异无统计学意义(χ2=1.024,P=0.311).miR-320a组Bel-7402迁移能力显著降低.对照组、空白组和miR-320a转染组Bel-7402细胞中β-catenin的相对表达量分别为1.66±0.07、1.62±0.06、0.64±0.02,差异有统计学意义(H=12.117,P=0.002).其中,miR-320a转染组显著低于空白组和对照组(H值分别为8.308、8.308,P值分别为0.004、0.004),空白组和对照组间差异无统计学意义(H=1.641,P=0.200).结论 miR-320a和NHERF1在HCC中表达降低,miR-320a可能通过Wnt信号转导通路发挥作用,抑制癌细胞的增殖.