肝细胞生长因子mRNA实时荧光定量PCR检测体系的建立及其在淋巴瘤诊断中的价值

摘要

目的构建肝细胞生长因子（HGF）mRNA 定量标准,建立实时荧光定量（FQ）-PCR 检测体系,探讨其检测淋巴瘤的应用价值。方法提取总 RNA,行逆转录（RT）-PCR,获 HGF cDNA 目标片段并构建重组质粒,作为定量标准。设计第二引物对和探针,确定扩增条件,优化组分浓度,建立 HGF mRNA 实时 FQ-PCR 检测体系,并定量检测47例淋巴瘤患者[霍奇金病（HD）11例,非霍奇金淋巴瘤（NHL）36例;治疗后,获缓解34例,未缓解13例]和19例非肿瘤患者的淋巴组织标本中 HGFmRNA 表达。同时,用受试者工作特征（ROC）曲线法,评价其在淋巴瘤诊断中的敏感度和特异度。结果本研究构建的 HGF mRNA 定量标准和实时 FQ-PCR 检测体系的标准曲线斜率为-3.513,相关系数为0.999,扩增效率达92.6%;批内、日内和日间变异系数分别为2.1%、4.0%和6.8%;灵敏性达2拷贝/μl。HGF mRNA 在淋巴瘤组的表达（6.425±2.172）显著高于非肿瘤对照组（0.317±0.192,t=15.883,P＜0.001）,缓解组的表达（6.157±1.712）显著低于未缓解组（7.591±1.184,t=2.768,P＜0.05）,但在 HD 组和 NHL 组的表达差异无统计学意义（P＞0.05）。ROC 曲线提示,当临床诊断临界值为3.316时,HGF mRNA 对淋巴瘤诊断的敏感度和特异度分别为93.6%和100%。结论本研究成功构建了 HGF mRNA 的定量标准和实时 FO-PCR 检测体系.并可用于淋巴瘤的 HGF mRNA 定量检测。