焦磷酸测序法检测结直肠癌患者K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变

摘要

目的探讨焦磷酸测序法检测结直肠癌患者肿瘤组织K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变方法的临床应用价值。方法以已知K-ras基因突变的结直肠癌细胞株SW480、DLD-1和野生型细胞株HT-29 DNA作为测序模板检验焦磷酸测序法的准确性。对含不同比例（2%、3%、5%、10%、20%、30%和50%）结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA混合样本采用焦磷酸测序法进行基因突变率检测,并与Sanger测序结果平行进行Fisher精确检验比较,评价其灵敏度。同时用焦磷酸测序法检测分析30份临床结直肠癌患者石蜡包埋组织中K-ras基因第12和13密码子突变。结果当混合已知突变类型的结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA样本突变DNA比例在5%和10%浓度时,Sanger测序法检出K-ras基因突变率分别为33.3%（4/12）和58.3%（7/12）,焦磷酸测序法分别为91.7%（11/12）和100%（12/12）,且2种方法检出K-ras基因突变率的差异有统计学意义（P＜0.05）此外,用焦磷酸测序法从30例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本中检出K-ras基因外显子2第12和13密码子突变10例,均为杂合型突变,突变率为33.3%（10/30）。最常见的突变类型为G＞A转换[50%（5/10）]和G＞T颠换[(30%（3/10）]。结论焦磷酸测序法检测结直肠癌K-ras基因外显子2第12和13密码子突变具有敏感、准确的优点,可用于临床个体化治疗中肿瘤基因突变检测。