糖蛋白质组学方法研究人类免疫缺陷病毒感染相关糖蛋白

摘要

目的研究HIV感染相关的人血浆糖蛋白质组变化,筛选新的抗病毒蛋白质或药物靶标。方法采用亲和纯化法去除AIDS患者（n=10）和健康对照（n=20）血浆中的白蛋白和免疫球蛋白,富集低丰度蛋白质。双向凝胶电泳（2-DE）分离富集的蛋白质,糖基化试剂盒染色,构建AIDS患者血浆糖基化蛋白二维凝胶电泳图谱,ImageMaster软件分析表达差异的糖蛋白,并进行质谱鉴定。对去除高丰度蛋白质的HIV和健康对照血浆进行PNGase F酶解,使糖蛋白去糖基化,二维凝胶电泳结合ImageMaster图像分析比较酶解后两类样品的差异蛋白质。差异糖蛋白经液相色谱串联高容量离子阱质谱（HCT）分析鉴定。结果经试剂盒处理,成功去除了血浆中高丰度的白蛋白和球蛋白,富集了低丰度蛋白质,获得HIV阳性感染者和健康对照血浆糖蛋白的二维凝胶电泳图谱,经PNGaseF酶解,使糖蛋白去糖基化,经液相色谱质谱分析,鉴定了13个差异糖基化蛋白质点,包括α1-抗胰蛋白酶前体蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N1等。结论筛选到可能与HIV感染相关的糖蛋白,如α1-抗胰蛋白酶前体蛋白等,为了解HIV感染机制及新的抗病毒药物靶标分子的筛选提供了帮助。