miR-9-5p靶向CXCL在幼年小鼠肺炎模型中的作用

摘要

目的:探讨miR-9-5p靶向CXCL11在幼年小鼠肺炎模型中的作用.方法:将36只小鼠分为对照组(Control)、模型组(Model)、miR-9-5p agomir组、agomir-NC组、miR-9-5p agomir+pcDNA3.1组、miR-9-5p agomir+pcDNA3.1-CXCL11组,每组6只.除对照组外,其余小鼠腹腔注射5 mg/kg LPS后,然后分别将miR-9-5p agomir、agomir-NC、miR-9-5p agomir+pcDNA3.1、miR-9-5p agomir+pcDNA3.1-CXCL11通过尾静脉注射的方式注射到对应分组小鼠体内,连续处理7 d后取出肺组织.通过RT-qPCR检测各组小鼠肺组织中miR-9-5p和CXCL11 mRNA表达水平,HE染色观察各组小鼠肺组织病理变化,ELISA试剂盒检测各组小鼠IL-1β、TNF-α含量,TUNEL检测各组小鼠细胞凋亡情况,双荧光素酶实验验证miR-9-5p与CXCL11的靶向关系,Western blot检测各组小鼠肺组织CXCL11、Bax、TLR4、p-p65、p-I-κB蛋白表达水平.结果:与对照组相比,幼年肺炎小鼠肺组织中miR-9-5p表达降低(P<0.05),而CXCL11 mRNA表达升高(P<0.05).转染miR-9-5p agomir后,miR-9-5p表达水平升高(P<0.05),CXCL11 mRNA表达水平下降(P<0.05).对照组小鼠肺组织无炎性浸润,结构完整,肺泡腔正常;模型组和agomir-NC组小鼠肺组织出现大量炎性浸润,肺泡结构受损,肺泡壁增厚,IL-1β、TNF-α含量、肺组织细胞凋亡率以及CXCL11、Bax、TLR4、p-p65、p-I-κB蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),而miR-9-5p agomir组小鼠肺组织炎性浸润减少肺泡结构受损和肺泡壁增厚情况得到改善,IL-1β、TNF-α含量下降,肺组织细胞凋亡率以及CXCL11、Bax、TLR4、p-p65、p-I-κB蛋白表达水平均显著下降(均P<0.05).双荧光素酶实验证实CXCL11是miR-9-5p的靶基因.与miR-9-5p agomir+pcDNA3.1组比,miR-9-5p agomir+pc-DNA3.1-CXCL11组IL-1β、TNF-α含量、肺组织细胞凋亡率以及Bax、CXCL11、TLR4、p-p65、p-I-κB蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05).结论:miR-9-5p靶向CXCL11可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路降低炎症反应、抑制细胞凋亡对幼年肺炎模型小鼠起到保护作用.