miR-22-3p调控TCTN1基因对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的机制研究

摘要

目的:探讨miR-22-3p对皮肤鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法:qRT-PCR检测正常皮肤组织和皮肤鳞状细胞癌组织中miR-22-3p和TCTN1 mRNA水平,Western blot检测TCTN1蛋白水平.转染miR-22-3p mimics或TCTN1小干扰RNA至皮肤鳞状细胞癌A431细胞,qRT-PCR检测miR-22-3p或Western blot检测TCTN1蛋白水平验证转染效果,MTT法检测过表达miR-22-3p或沉默TCTN1表达对A431细胞增殖的影响,流式细胞术检测过表达miR-22-3p或沉默TCTN1表达对A431细胞凋亡的影响,Western blot检测过表达miR-22-3p或沉默TCTN1表达对A431细胞CyclinD1、Ki-67、Cleaved caspase-3蛋白表达的影响.生物信息学软件预测显示TCTN1的3'UTR中含有与miR-22-3p互补的核苷酸序列,双荧光素酶报告基因实验验证miR-22-3p与TCTN1的靶向关系.结果:与正常皮肤组织相比,皮肤鳞状细胞癌组织中miR-22-3p水平明显降低(P<0.05),TCTN1 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05).过表达miR-22-3p或沉默TCTN1表达后,A431细胞活性、Ki-67和CyclinD1蛋白表达降低(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达升高(P<0.05).miR-22-3p在A431细胞中靶向负调控TCTN1表达.过表达TCTN1逆转了过表达miR-22-3p对A431细胞增殖、凋亡及相关蛋白CyclinD1、Ki-67和Cleaved caspase-3表达的影响.结论:过表达miR-22-3p通过靶向负调控TCTN1表达抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖,并促进其凋亡.