嵌合抗CD20抗体片段F(ab')2的表达及活性

摘要

目的:为了简化生产步骤,提高抗体蛋白的生物活性,探索在工程菌体内直接进行抗CD20F(ab')2的高效率分泌性表达.方法:采用单因素考察法优化培养条件,使蛋白G柱和S200-HR分子筛柱分离纯化目的蛋白,用MTT法检测抗CD20F(ab')2抑制Daudi细胞体外生长的活性.结果:发现用论文所选定的最适培养条件,抗CD20F(ab')2的产量有了明显提高,从1.9～2.2 mg/L达到了3.7～4.3 mg/L,F(ab')2在表达产物中所占的比例也从9.7%～13.2%提高到了38.1%～46.8%;使用S200-HR分子筛柱对蛋白G柱亲和纯化后的产物进一步分离纯化,可以使F(ab')2的纯度达到85%以上;MTT法检测结果证明F(ab')2抑制Daudi细胞生长的IC50值为14.6 μg/ml,而Fab'为39.5 μg/ml.结论:实现了抗CD20F(ab')2在工程菌体内的高效率分泌性表达,而且所表达的抗CD20F(ab')2比抗CD20Fab'具有更强的抑制Daudi细胞体外生长的能力.