用于大容量噬菌体抗体库的表达载体的构建及鉴定

摘要

目的:构建一个适用于大容量抗体库的噬菌体抗体表达载体.方法:通过插入人工合成寡核苷酸、PCR介导的定位突变等技术,将载体p3MH进行改造,使之更适于构建大容量抗体库.通过噬菌体抗体的表达、ELISA及细胞内重组试验鉴定所获得的表达载体.结果:通过插入loxp511和loxp序列,将Lac启动子更换为阿拉伯糖启动子、改造抗体基因克隆位点等,将p3MH改造成pAL.经检测pAL可以表达具有功能的Fab噬菌体抗体,其表达调控更为严密,可以在cre+细菌胞内发生预期的loxp-cre介导的定位重组.结论:所获得的表达载体pAL适用于构建大容量Fab噬菌体抗体库.