HBc-HLA-A*1101-β2m复合物单体及其四聚体的制备和鉴定

摘要

目的:制备HBc-HLA-A*1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定.方法:原核高效表达的HLA-A*1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽(乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96)的存在下,体外复性折叠成可溶性的HLA-A*1101抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体;然后将此复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体;最后用流式细胞仪检测分析该四聚体结合特异性CTL的能力.结果:Western blot和Dot-ELISA检测显示所制备的HLA-A*1101抗原肽复合物单体具有天然构象,且可被生物素化;流式细胞仪分析显示所制备的四聚体可与HLA-A11+供者的抗原特异性CTL结合.结论:成功制备了具有完整构象的生物素化HLA-A*1101抗原肽复合物单体;此四聚体可以特异检测抗原特异性的细胞毒性T细胞.