同位素稀释-HPLC-ESI-MS/MS法同时测定癫痫患儿血浆中左乙拉西坦、奥卡西平活性代谢物和拉莫三嗪的药物浓度

摘要

目的:建立基于高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定癫痫患儿血浆中左乙拉西坦(levetiracetam,LEV)、奥卡西平活性代谢物10-羟基卡马西平(monohydroxy-carbazepine,MHD)和拉莫三嗪(lamotrigine,LTG)浓度的方法。方法:样品经沉淀蛋白法进行前期处理,分别以LEV-D6、奥卡西平-D4、LTG-^(13)C3-D3为内标,采用Phenomenex Kinetex®EVO C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,26μm),以0.07%甲酸-1 mmoL乙酸铵-水(A)和甲醇(B)为流动相进行梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(-1)。质谱检测采用电喷雾离子源正离子模式,多离子反应监测模式扫描。考察该方法的专属性、定量下限(LLOQ)、标准曲线、残留和稀释效应、准确度精密度、基质效应和稳定性。结果:LEV和MHD的血药浓度在0.1~50μg·mL^(-1)内线性关系良好(r>0.9991),LLOQ均为0.1μg·mL^(-1);LTG的血药浓度在0.05~25μg·mL^(-1)内线性关系良好(r>0.9992),LLOQ为0.05μg·mL^(-1)。批内和批间精密度RSD≤7.0%,稳定性良好,不受正常血浆和溶血血浆(溶血程度≤5%)基质的影响,方法学验证均符合《中国药典》2020年版规定。结论:本方法快速、简便、稳定、经济,可应用于左乙拉西坦、奥卡西平和拉莫三嗪儿童治疗药物监测和药动学研究。