1α,25-二羟维生素DB3B对HepG2细胞中细胞色素P450酶同工酶3A4的诱导作用

摘要

目的观察1α,25-二羟维生素DB3B[1α,25-（OH）B2BDB3B]对HepG2细胞中细胞色素P450酶同工酶3A4（CYP3A4）的诱导特点,为药物代谢研究建立简便高效的细胞模型提供依据。方法选取3个浓度的1α,25-（OH）B2BDB3B（0.10、0.25、0.35μmol/L）加入HepG2细胞中,分别在培养24、48、72、96 h时,以四甲基偶氮唑盐法观察细胞活性,RT-PCR法检测CYP3A4 mRNA的表达,Western blot检测CYP3A4蛋白的表达。结果3个浓度的1α,25-（OH）B2BDB3B对HepG2细胞无毒性作用。未经1α,25-（OH）B2BDB3B诱导的HepG2细胞CYP3A4 mRNA的表达很低,3个浓度的1α,25-（OH）B2BDB3B在诱导的第24小时未见到CYP3A4 mRNA表达增高;在48 h,3个处理组的CYP3A4 mRNA表达量分别是对照组的120%、134%、200%;72 h达174%、254%、420%; 96 h为258%、450%、370%。未经诱导的HepG2细胞CYP3A4蛋白的表达很低,在3个浓度下,诱导后的第24小时未见到CYP3A4蛋白表达的增高;在48 h,0.10μmol/L组未观察到诱导表达增加, 0.25μmol/L组和0.35μmol/L组诱导倍数分别为1.2和2.2;72 h各浓度处理组诱导倍数分别达1.8、3.4和6.5;96h分别为4.1、6.1、7.2。结论1α,25-（OH）B2BDB3B可以较好的诱导HepG2细胞中CYP3A4在转录水平和蛋白质表达水平的表达,可应用于CYP3A4酶被抑制导致的药源性肝损害或其他毒性和不良反应的研究。