慢性乙型肝炎患者浆样树突状细胞体外诱导CD4+CD25+调节性T细胞的研究

摘要

目的观察慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎恢复者和健康人浆样树突状细胞（pDCs）体外诱导CD4+CD25+调节性T细胞（CD4+ CD25+ Treg）能力的差异,为阐明HBV感染慢性化的机制奠定基础。方法采用免疫磁珠分离法体外分离46例慢性乙型肝炎患者、10例乙型肝炎恢复者和25名健康人外周血单个核细胞中pDCs,并将其分别与健康人CD4+CD45RA+初始T细胞共培养。采用HBcAg或破伤风毒素对去除CD25+细胞的外周血单个核细胞进行增殖刺激后,使用流式细胞仪及RT PCR对pDCs-T共培养细胞中CD4+CD25+Treg的数量、表型及FOXP3基因表达情况进行测定;采用酶联免疫吸附法对共培养细胞上清液中的白细胞介素10和转化生长因子β1进行了进一步检测。两组数据比较采用Mann whitney U test。结果当细胞增殖刺激物为HBcAg时,细胞增殖幅度慢性乙型肝炎患者组为（7999.36±374.74）cpm,乙型肝炎恢复者组为（11282.56±1174.46） cpm和健康人组为（12 304.58±1462.81）cpm,慢性乙型肝炎患者组细胞增殖幅度明显小于乙型肝炎恢复者组和健康人组,U-0～22.0,P值均＜0.05;乙型肝炎恢复者组和健康人组间增殖幅度差异无统计学意义。当增殖刺激物为破伤风毒素时,细胞增殖幅度与阳性对照组之间,差异无统计学意义。CD4+CD25+Treg比例慢性乙型肝炎患者组为5.99%±1.85%,乙型肝炎恢复者组为3.04%±0.79%,健康人组为3.01%±1.53%,慢性乙型肝炎患者组中的CD4+ CD25+ Treg比例明显高于乙型肝炎恢复者组和健康人组,U=6.0～71.5,P值均＜0.05。3组人群pDCs-T共培养细胞的CD4+CD25+T细胞均检测到Fox p3 RNA,而在CD4+CD25 T细胞中,均未检测到Fox p3 RNA。3组人群pDCs-T共培养细胞实验组上清液的白细胞介素-10和转化生长因子β1含量均明显高于阳性对照组。结论pDCs以诱导CD4+CD25+ Treg形式参与了乙型肝炎的慢性化。