微小RNA-221对HepG2细胞增殖及其凋亡的影响

摘要

目的探讨微小RNA-221（miR-221）对肝癌细胞株HepG2细胞增殖与凋亡的影响。方法将miR-221阻遏物及模拟物转染至HepG2后,用实时荧光定量RT-PCR检测miR-221的表达水平;用细胞增殖试剂盒、Hoechst 33342及碘化丙啶（PI）双重染色、流式细胞仪及caspase3/7活性试剂盒检测HepG2细胞增殖与凋亡情况。对数据进行多样本的单因素方差分析,两两比较采用LSD法;相关性比较用Pearson检验。结果 RT-PCR结果显示,转染miR-221阻遏物后其表达受到抑制,而转染miR-221模拟物可促进其表达。细胞增殖试剂盒及Hoechst 33342/PI染色结果显示,48 h后miR-221阻遏物明显抑制HepG2细胞增殖（P＜0.05）,而miR-221模拟物促进HepG2细胞增殖（P＜0.05）,两种方法结果呈正相关（r=0.993,P＜0.01）。流式细胞仪检测细胞周期显示,miR-221模拟物组G1期细胞比例（47.67%±1.53%）明显低于空白对照组（59.00%±1.00%）及阴性对照组（58.00%±1.00%,F=81.77,P＜0.01）;S期细胞比例（20.33%±1.15%）明显高于空白对照组（11.00%±1.00%）及阴性对照组（12.00%±1.00%,F=70.90,P＜0.01）。Hoechst 33342/PI染色、流式细胞仪膜联蛋白V凋亡试剂盒检测均显示,转染miR-221阻遏物48 h后,细胞凋亡和坏死增加（P＜0.05）,差异有统计学意义。Caspase-3/7试剂盒检测caspase-3/7活性变化结果显示,转染miR-221阻遏物24 h后,细胞caspase3/7活性明显增高（P＜0.05）,差异有统计学意义。结论 miR-221可促进肝癌细胞生长增殖,抑制miR-221表达可诱导细胞凋亡。miR-221有望成为治疗肝癌新的分子靶点之一。