白蛋白和角蛋白19双标记胚胎干细胞的建立及其向肝祖细胞的分化

摘要

目的建立白蛋白（Alb）和角蛋白19（CK19）双标记的胚胎干细胞系,并探讨其在肝祖细胞分化中的应用。方法构建含有Alb启动子的绿色荧光蛋白载体,并带有新霉素抗性,同时构建由CK19启动子启动红色荧光的载体,带有潮霉素抗性;将构建好的载体线性化后,同时电转胚胎干细胞E14.1,利用新霉素和潮霉素双筛选后,建立双标记基因修饰胚胎干细胞系E14.1-2;通过拟胚体形成及生长因子（骨形态发生蛋白4和碱性成纤维细胞生长因子）刺激的方法诱导产生肝祖细胞,经过流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应检测诱导效率。结果构建了含有Alb启动子启动绿色荧光和CK19启动子启动红色荧光的载体,并证明了Alb和CK19启动子能特异启动各自蛋白的表达;建立了Alb和CK19双标记胚胎细胞系,并证明其具有多能性,显著表达多能性基因八聚体结合转录因子4和阶段特异性胚胎抗原1,在E14.1-2诱导分化22 d后通过流式细胞术分选成功得到21.27%Alb和CK19双阳性的肝祖细胞。结论双标记胚胎干细胞的建立可以纯化和定量肝祖细胞,便于改进肝向诱导的方法及研究肝祖细胞特性。