沉默丛生蛋白表达增加肝癌细胞对抗癌药物的敏感性

摘要

目的探讨丛生蛋白（CLU）与肝癌细胞化疗药物敏感性的关系及其机制。方法通过Western blot对比分析肝癌细胞及阿霉素耐药HepG2/ADM细胞CLU蛋白表达水平;使用特异性shRNA转染HepG2/ADM细胞, 并通过RT-PCR筛选CLU-mRNA有效干扰质粒;通过MTT法及荧光双染法分析HepG2/ADM细胞对常见化疗药物敏感性的变化;采用流式细胞仪分析HepG2/ADM细胞中Rh123蓄积水平的改变。计量资料两组间均数比较采用t检验, 三组及以上均数比较采用方差分析, 并进行SNK（q检验）两两比较;计数资料用χ2检验。结果肝癌细胞（Hep3B、SMMC7721、PLC、HepG2）及HepG2/ADM细胞CLU过表达。与阴性对照组比较, CLU mRNA抑制率在shRNA-1组为73.68%（q = 23.011, P ＆ 0.01）、shRNA-2组为39.26%（q = 11.991,P ＆ 0.01）、shRNA-3组为62.36%（q = 19.392,P ＆ 0.01）、shRNA-4组为55.35%（q = 17.149,P ＆ 0.01）;shRNA-1转染组耐药细胞株对化疗药物敏感性明显上升, 阿霉素诱导HepG2/ADM细胞凋亡增加;shRNA-1组癌细胞凋亡率为39.28%, 阴性对照组凋亡率为4.92% （χ2 = 196.77,P ＆ 0.01）;Rh123蓄积水平升高, 且多药耐药1 mRNA表达受抑制（shRNA-1组与阴性对照组比较:q = 14.604,P ＆ 0.01）。结论沉默CLU可增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性, 提示CLU为逆转肝癌多药耐药的潜在靶目标。