非酒精性脂肪性肝炎相关肝细胞癌小鼠模型的建立与鉴定

摘要

目的用高脂高胆固醇饮食喂养载脂蛋白E和低密度脂蛋白受体双基因敲除（ApoE-/-/LDLR-/-）小鼠, 构建一种基于基因敲除小鼠的非酒精性脂肪性肝炎相关肝癌模型。方法首先用两种基因敲除小鼠ApoE-/-和LDLR-/-交配, 从后代中鉴定筛选出ApoE-/-/LDLR-/-纯合子小鼠。纯合子小鼠交配繁殖的子代在出生后2～3 d内注射链脲佐菌素（STZ）, 断乳后继续高脂高胆固醇饮食至第20周。同时设立对照组ApoE-/-/LDLR-/-小鼠断乳后普通饮食。并于第10、16、20周末分批处死小鼠, 检测体质量及生物化学指标。肝组织HE、油红O染色和Masson染色评价病理学改变。免疫组织化学分析肝癌标志物磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（Glypican3）的表达情况。结果模型组小鼠空腹血糖、总胆固醇水平均明显高于对照组（P ＆ 0.01）, 丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）和总甘油三酯随造模时间延长逐渐增加, 在20周时差异均有统计学意义（P ＆ 0.05）。与对照组相比较, HE染色结果显示模型组小鼠10周出现酒精性脂肪性肝炎, 16周出现异型增生结节, 20周出现早期肝癌。肝脏油红O染色面积、密度、染色强度等结果提示在10周酒精性脂肪性肝炎阶段脂肪变程度最高, 而后随造模时间延长脂肪变程度相对减轻。Masson染色结果显示模型组小鼠16周有轻度窦周纤维化, 20周癌组织周围纤维化, 有纤维间隔形成。对照组HE染色、油红O染色、Masson染色均未见异常。免疫组织化学结果显示模型组小鼠16周Glypican3在结节部位表达阳性, 20周在肝癌组织细胞质表达阳性。结论新出生ApoE-/-/LDLR-/-小鼠经STZ注射后高脂高胆固醇饮食20周可以模拟脂肪肝相关肝细胞癌的疾病进程, 可能不经过肝硬化直接发展成为早期肝癌。