甲异靛对K562细胞bcr-abl信号通路的影响以及诱导细胞凋亡机制研究

摘要

目的探讨甲异靛对 K562细胞 bcr-abl 信号通路的影响以及甲异靛诱导 K562细胞凋亡的机制。方法应用流式细胞术检测甲异靛诱导 K562细胞凋亡的情况以及线粒体膜电位稳定性。应用 Western blot 技术检测 bcr-abl 信号通路相关蛋白、caspase 以及 Bcl-2家族成员在甲异靛作用前后的表达情况。RT-PCR 技术检测甲异靛作用前后 bcr-abl mRNA 表达水平,用电泳移动迁移速度分析检测 STAT3、STAT5的 DNA 结合能力。结果 20μmol/L 甲异靛可降低 bcr-abl 融合蛋白的表达及其磷酸化水平,但并不改变其 mRNA 表达水平,甲异靛可降低 STAT5以及 CRKL 的磷酸化水平,抑制 STAT3、STAT5的 DNA 结合能力。5～20 μmol/L 甲异靛可诱导 K562细胞凋亡并且具有浓度依赖性。甲异靛诱导 K562细胞凋亡中伴随 caspase 3、8、9活化以及细胞线粒体膜电位降低,caspase 3、8、9特异抑制剂z-DEVD-fmk、z-IETD-cho 和 z-LETD-fmk 可阻断甲异靛诱导的 K562细胞凋亡。甲异靛诱导 K562细胞凋亡前后不伴有 Bcl-2、Bax、Bid 蛋白表达水平的改变。结论甲异靛通过降低 bcr-abl 融合蛋白的表达并抑制 bcr-abl 信号通路中相关蛋白活性从而抑制 K562细胞的增殖。甲异靛诱导 K562细胞凋亡依赖于 caspase 活化以及线粒体途径,但 Bcl-2家族成员不参与凋亡的调控。