5-氮杂胞苷对骨髓瘤细胞增殖抑制作用及对XAF1基因表达的影响

摘要

目的探讨5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞系RPMI 8226和XG-细胞中XAF1基因表达的影响及体外抗骨髓瘤作用的机制。方法采用逆转录PCR和Western blot方法检测骨髓瘤细胞系RPMI 8226和XG-7细胞中XAF1基因和蛋白的表达。采用甲基化特异性PCR （MSP ）方法检测XAF1基因启动子CpG岛甲基化状态。采用0 -5 μmol/L 5-氮杂胞苷处理骨髓瘤细胞株。采用CCK-8比色法检测5-氮杂胞苷处理对骨髓瘤细胞增殖抑制作用。采用Annexin V/7-AAD染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果XG-7细胞不表达XAF1 mRNA及蛋白,RPMI 8226细胞表达XAF1 mRNA转录本1和2 。 XG-7和RPMI 8226细胞XAF1基因启动子CpG岛均存在过甲基化。XG-和RPMI 8226细胞经2.5 μmol/L5-氮杂胞苷处理72 h后仅表达XAF1 mRNA转录本1并表达XAF1蛋白,并且XAF1基因启动子CpG岛甲基化程度降低。5-氮杂胞苷抗骨髓瘤作用呈时间和浓度依赖性。5-氮杂胞苷处理RPMI 8226和XG-7细胞48 h的IC5O值分别为2.4 μmol/L和2.6 μmol/L。结论骨髓瘤细胞中抑癌基因XAF1表达缺失或表达异常与XAF1基因启动子CpG岛过甲基化有关。5-氮杂胞苷处理可以诱导XAF1 mRNA及蛋白表达。5-氮杂胞苷在临床上能达到的药物浓度下具有抗骨髓瘤作用,其作用机制是诱导骨髓瘤细胞凋亡。