脂多糖结合蛋白与脂多糖结合位点模拟肽的筛选

摘要

目的 应用噬菌体随机12肽库筛选脂多糖结合蛋白(LBP)与脂多糖结合位点的多肽序列.方法 以脂多糖为固相筛选分子,对噬菌体12肽库进行4轮亲合筛选,采用酶联免疫吸附法鉴定筛选后的噬菌体克隆与脂多糖的结合活性,取结合活性较高的克隆进行DNA测序,推导其多肽序列并与LBP序列比对,再进行竞争抑制实验检测筛选噬菌体与LBP竞争结合的效力.结果 选取的86个噬菌体克隆中,多数结合实验鉴定阳性,取20个亲和力最高的克隆测序,得到20条不同编码的12肽序列,20条多肽与LBP一级结构有不同程度同源性,均为模拟肽.12个噬菌体克隆有较高的竞争抑制率.结论 用噬菌体12肽库成功筛选出LBP与脂多糖结合位点模拟肽,为进一步以这些多肽为先导物进行定向进化研究提供了实验依据和结构基础.