活体小鼠坐骨神经的形态学观察

摘要

目的使用表达绿色荧光蛋白的转基因小鼠,建立用激光共聚焦显微镜活体、实时观察周围神经形态的方法。方法将转基因小鼠麻醉后,分离显露坐骨神经,并将小鼠固定于激光共聚焦显微镜操作台,使显露的坐骨神经与载玻片贴合,从而观察活体小鼠坐骨神经的形态学特点。测量神经干、神经束及神经纤维的直径,并计算神经束及神经纤维的数量;将小鼠坐骨神经切断或钳夹,造成神经损伤模型,在损伤即刻及损伤后2 h,观察损伤神经近端、损伤处及损伤远端形态的改变。结果正常小鼠坐骨神经神经干直径为800.0μm,神经束直径为70.0～100.0μm,神经束数量为2个,神经纤维直径为7.5μm,神经纤维数量为70～200个。神经损伤即刻及损伤后2 h,损伤近端处可见神经纤维逐渐出现空泡样变性,神经纤维走向逐渐紊乱,部分纤维中断。损伤段神经纤维完全扭曲,空泡样变性明显,并出现神经纤维崩解,神经连续性完全中断。损伤远端250.0μm及500.0 μm处,神经纤维荧光强度逐渐增强,结构恢复,排列逐渐整齐。结论绿色荧光蛋白转基因小鼠结合激光共聚焦显微镜在体成像技术为实现活体实时观测周围神经提供了良好的技术平台,可用于观察小鼠正常及损伤后周围神经结构的形态和变化。