miR-383通过调控FBXO5表达抑制人牙周膜细胞成骨分化和迁移

摘要

目的探讨miR-383对人牙周膜细胞(hPDLCs)成骨分化和迁移的影响及机制。方法分离培养hPDLCs,再进行成骨诱导,取第0、1、7、14天细胞用于实验。将miR-con、miR-383、anti-miR-con、anti-miR-383、pcDNA、pcDNA-F-box蛋白(FBXO)5分别转染至hPDLCs中,分别记为miR-con组、miR-383组、anti-miR-con组、anti-miR-383组、pcDNA组、pcDNA-FBXO5组;将anti-miR-383分别与si-con、si-FBXO5共转染至hPDLCs中,记为anti-miR-383+si-con组、anti-miR-383+si-FBXO5组。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-383和FBXO5 mRNA表达水平;Western印迹检测FBXO5、Runt相关转录因子(RUNX)2、碱性磷酸酶(ALP)、OSX、骨钙素(OCN)、核转录因子(NF)-κB抑制蛋白(IκB)和磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达;划痕实验和Transwell实验检测hPDLCs迁移;双荧光素酶报告基因检测miR-383和FBXO5的靶向关系。结果与成骨诱导第1天细胞相比,第7、14天细胞中miR-383表达水平显著降低,FBXO5 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。干扰miR-383表达和过表达FBXO5,hPDLCs中RUNX2、ALP、OSX和OCN蛋白表达水平显著升高,hPDLCs迁移数量显著升高,细胞间相对宽度显著降低(P<0.05)。miR-383靶向调控FBXO5,沉默FBXO5部分逆转干扰miR-383 hPDLCs迁移和成骨分化的促进作用。干扰miR-383表达,p-IκBα表达水平显著降低,抑制NF-κB信号通路激活,而沉默FBXO5部分逆转干扰miR-383对NF-κB信号通路的抑制作用。结论干扰miR-383表达可促进hPDLCs成骨分化和迁移,其机制可能与FBXO5和NF-κB信号通路相关。