脂肪间充质干细胞移植对输血相关急性肺损伤大鼠巨噬细胞表面TLR4及CD40的影响

摘要

目的 探讨脂肪间充质干细胞(ADMSCs)移植对输血相关急性肺损伤(TRALI)大鼠巨噬细胞表面Toll样受体(TLR)4及共刺激分子CD40的影响.方法 体外培养ADMSCs,雄性SD大鼠30只随机分为假手术组(采用假手术处理)、TRALI组〔腹腔注射脂多糖(LPS)2 mg/kg,2 h后静脉输注人血浆(1 ml/只)〕、移植组〔腹腔注射LPS 2 mg/kg,2 h后静脉输注入血浆(1 ml/只)+ADMSCs悬液1 ml〕,各10只.荧光显微镜观察氯甲基苯甲酰氨(CM-DiI)标记的ADMSCs存活及分布情况;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清及肺组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β及缺血预适应上调蛋白(MIP)-2的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测大鼠肺组织TLR4、CD40、核转录因子(NF)-κB基因相对表达量,取外周血巨噬细胞检测TLR4、CD40、NF-κB的mRNA表达量;取肺组织,采用放射免疫沉淀试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、8-羟基脱氧鸟嘌呤(OhdG)的含量;采用苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理及湿干比变化.结果 CM-DiI标记的ADMSCs在荧光显微镜下呈红色荧光,阳性标记率达98％以上.TRALI组大鼠血清及肺组织TNF-α、IL-1β、MIP-2含量显著高于假手术组,移植组显著低于TRALI组(P<0.05).TRALI组大鼠肺组织及血清中TLR4、CD40、NF-κB的mRNA表达量均显著高于假手术组,移植组显著低于TRALI组(P<0.05).TRALI组大鼠肺脏组织SOD、GSH含量显著低于假手术组,移植组显著高于TRALI组;MDA、8-OhdG含量显著高于假手术组,移植组显著低于TRALI组(P<0.05).TRALI组大鼠肺组织出现肺泡间隔增厚等病理变化,移植组各种病理变化较TRALI组明显好转.结论 TRALI后TLR4及CD40表达量明显上升,诱发炎症等一系列反应,从而导致肺损伤,ADMSCs移植可减轻肺损伤程度.