TFAM重组腺病毒的构建及其对骨关节炎软骨细胞的保护作用

摘要

目的 通过构建重组腺病毒载体,转染骨关节炎软骨细胞,探讨线粒体转录因子A(TFAM)保护软骨细胞退变的作用.方法 构建TFAM重组腺病毒载体,并转染骨关节炎软骨细胞.分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹法检测转染后细胞中TFAM mRNA及蛋白的表达情况；鉴定转染后软骨细胞线粒体DNA拷贝数的变化.结果 成功构建TFAM重组腺病毒,且体外转染率高；RT-PCR结果示细胞转染后MOI为500、1 000组TFAM mRNA的表达明显升高(P＜0.01)；Western印迹结果示转染后MOI为500、1 000两组TFAM蛋白表达均升高,其中MOI=1 000组表现最为明显(P＜0.01)；骨关节炎细胞组线粒体DNA的平均拷贝数为(389±117),而MOI=500组为(575±144),MOI=1 000组为(762±179),前者显著低于后两者(P＜0.01).结论 转染TFAM重组腺病毒可正向增强其在软骨细胞中的表达,保持线粒体DNA结构的稳定性.