内含人前列腺特异性抗原mRNA的耐核糖核酸酶病毒样颗粒的构建和表达

摘要

目的构建原核表达系统,表达内含人前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)mRNA部分序列的病毒样颗粒,该病毒样颗粒因噬菌体蛋白包被重组RNA而使其包裹的RNA具有耐核糖核酸酶(RNase)的特性.方法采用聚合酶链反应扩增人前列腺特异性抗原cDNA的部分保守区域,进行TA克隆后用限制性内切酶HindⅢ酶切获得所需要的目的片段,与用Hind Ⅲ酶切的表达载体pNCCL1相连接,构建一新的表达载体pNCCL1-PSA,再转化E.Coli BL21-DE3,用IPTG诱导表达噬菌体MS2包膜蛋白,包膜蛋白可进行自我组装成病毒样颗粒并将PSAmRNA部分序列包裹到病毒样颗粒内.结果成功构建得到了新的表达载体pNCCL1-PSA,经原核表达得到耐RNase的内含PSA mRNA部分RNA序列的病毒样颗粒.结论本研究得到的表达载体pNCCL1-PSA及原核表达系统,可以作为以后构建和制备耐RNase的PSA mRNA标准品和质控品的的平台,为实验室PSA mRNA的检测提供新的标准品及质控品.