目的 探讨斑蝥素对血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移的作用及机制.方法 组织块贴壁法获取原代血管平滑肌细胞(vascular smooth muscular cells,VSMC),运用VSMC表型标志蛋白抗体免疫荧光染色鉴定细胞,PDGF-BB诱导细胞增殖和迁移,并使用不同浓度斑螯素加以处理.将实验分为,对照组(A组);PDGF-BB组(B组);PDGF-BB+5 μmol/L斑蝥素组(C组);PDGF-BB+ 10 μmol/L斑蝥素组(D组).采用CCK-8细胞计数试剂盒检测细胞活性和增殖情况.细胞划痕实验检测细胞迁移水平.Western blot检测基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、总蛋白激酶B(t-Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及平滑肌细胞特异性蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM-actin)表达水平.结果 与DMSO处理的细胞比较,不同剂量(0.625、1.25、2.5、5和10 μmol/L)斑螯素处理的细胞活性无统计学差异(P＞0.05).与A组比较,B组细胞增殖活性和细胞迁移率显著提高[2.46±0.19 vs 1.49±0.12,(88.79±0.61)％vs (42.63±3.93)％,P＜0.05];与B组比较,C组、D组细胞增殖活性和细胞迁移率显著降低[0.91±0.07 vs 2.46±0.19,0.61±0.04 vs 2.46±0.19,(39.90±4.30)％ vs (88.79±0.61)％,(20.33±6.13)％ vs (88.79±0.61)％,P＜0.05]. Western blot结果显示,与A组比较,B组MMP-9、p-Akt的表达水平显著增加,α-SM-actin的表达水平显著降低(P＜0.05);与B组比较,C组、D组MMP-9、p-Akt的表达水平显著降低,α-SM-actin的表达水平显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 斑蝥素可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖和迁移,其机制可能与下调p-Akt及MMP-9蛋白表达水平有关.
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