结缔组织生长因子对Kupffer细胞诱导的肝星状细胞激活的影响

摘要

目的探讨肝星状细胞（hepatic stellate cell,HSC）结缔组织生长因子（connective tissuegrowth factor,CTGF）表达对 Kupffer 细胞（KC）诱导的 HSC 激活的影响。方法构建含 CTGF 的RNA 干扰载体。将肝星状细胞系 rHSC-99分为3组:对照组、空载体组和 RNA 干扰组。采用 RT-PCR方法检测 HSC 的 CTGF 表达。分离培养 KC,建立各组 HSC 与 KC 的共培养体系,MTT 检测 HSC 的增殖情况;RT-PCR 检测 HSC 的 TGF-β1、Ⅰ型前胶原的表达;Western Blot 检测 HSC 的 TGF-β1表达,ELISA 检测共培养上清中Ⅰ型胶原的表达;免疫荧光化学检测 HSC的α-SMA 的表达。结果构建CTGF 的 RNA 干扰载体 Psilencer 3.1H1-Neo-CTGF。RNA 干扰后 CTGF 表达降低22%。KC 得率为5×10~7,活率＞98%。在 HSC 和 KC 共培养体系中,RNA 干扰 HSC 的 CTGF 表达后,与 KC 共培养的HSC 活化和增殖明显被抑制,与对照组相比,HSC 的增殖降低29%（t=20.17,P＜0.01）。Ⅰ型前胶原和α-SMA 的表达下降38%,细胞培养上清中Ⅰ型胶原的分泌量下降48%（t=12.18,t=7.81,t=15.96,均P＜0.05）。TGF-β表达则没有明显的变化。结论阻断 HSC 的 CTGF 表达能抑制由 KC诱导的 HSC 激活。