长链非编码RNA调节细胞周期素D1表达对结直肠癌细胞辐射敏感性的影响

摘要

目的筛选影响结直肠癌细胞辐射敏感性的长链非编码RNA（1ncRNA）并探讨其作用机制。方法选取RKO和Lovo结直肠癌细胞株梯度照光后行克隆形成实验,应用单击多靶数学模型计算存活分数SF2值并绘制剂量存活曲线;高通量lncRNA/mRNA芯片筛选在RKO与Lovo、以及2 Gv照光前后RKO细胞中表达差异2倍以上的lncRNA基因和蛋白编码基因;采用GeneOntology联合Pathway综合分析阳性表达基因主要作用通路;实时PCR进一步检测验证RKO细胞株照光前后P53、P21、细胞周期素（cyclin）D1表达变化。结果克隆形成实验显示,Lovo细胞株SF2=0.47,RKO细胞株SF2=0.53,Lovo辐射敏感性显著高于RKO（P＜0.05）。高通量lncRNA/nRNA芯片筛选得到阳性表达长链非编码RNA基因268条,蛋白编码基因270条;Gene Ontologv联合Pathway综合分析显示:细胞周期相关基因所占比重最大（38.6%）,并有多条lncRNA表达水平与cyclin D1编码基因CCND1组骨表达差异显著相关。RKO与Lovo两株细胞P53和P21相对表达量的差异均无统计学意义（P＞0.05）,RKO细胞cvclin D1相对表达量明显高于Lovo细胞（P＜0.05）;RKO细胞株经2 Gy剂量照射前后,P53和P21相对表达量的差异无统计学意义（P＞0.05）,而cyclin D1表达明显下调（P＜0.05）。结论 lncRNA可能通过形成转录复合物与CCND1基因结合,调节cyclin D1蛋白表达进而影响结直肠癌细胞辐射敏感性;且lncRNA对cyclin D1表达的调节不依赖于P53-P21-cvclin D1通路。