革胡子鲶感染维氏气单胞菌后β-防御素基因的时空表达分析

摘要

给体质量(63.84±5.91)g的革胡子鲶(Clarias garepanius)腹腔注射0.2 mL浓度为4×108 CFU/mL的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),对照组注射同等剂量的生理盐水.注射后3 h、6 h、12 h、24 h、36 h、48 h、72 h和96 h时,感染组和对照组各取鱼15尾,用200 mg/L的MS-222麻醉后,应用实时荧光定量PCR技术,分析感染维氏气单胞菌前后β-防御素基因在革胡子鲶脾脏、肾脏、头肾、鳃、肠道和皮肤中的表达.结果显示:β-防御素基因在健康革胡子鲶体内(对照组)上述6种组织中均有表达,在脾脏中表达量显著高于其余5种组织(P＜0.05).感染维氏气单胞菌后3～96h,6种组织中β-防御素基因的时序表达谱不同.攻菌3h头肾、皮肤和鳃中该基因表达量显著上调,高于对照组以及感染后的其他各时间点,分别为对照组的6.48倍、3.86倍和1.80倍(P＜0.05);脾脏在24 h表达量达到峰值,为对照组的2.76倍(P＜0.05);肾脏和肠道也在3 h表达量最大,但与对照组差异不显著(P＞0.05).组织间比较得出:在感染后3 h和6 h,脾脏和头肾间β-防御素基因的表达量差异不显著,但头肾和脾脏的表达量分别在3 h和6 h显著高于其余4种组织,之后各感染时间点均是脾脏的表达量最高,且在24h差异最大(P＜0.05).上述结果说明:检测的6种组织都参与革胡子鲶对维氏气单胞菌感染的免疫应答反应,但在感染早期(3 h和6 h)头肾和脾脏防御作用较强,之后脾脏在病原菌侵染中起更为重要的防御作用.