长链非编码RNA ST8SIA6-AS1通过调节微小RNA-142-3p促进肝细胞癌的增殖和侵袭

摘要

目的探讨ST8SIA6-AS1靶向结合微小RNA（microRNA,miR）-142-3p,影响肝细胞癌的增殖和侵袭能力。方法用基因表达谱数据动态分析（GEPIA）验证ST8SIA6-AS1在肝细胞肝癌（HCC）和邻近正常组织中的差异表达。采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测ST8SIA6-AS1和miR-142-3p在组织水平和细胞水平的表达量。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）和集落形成实验检测人肝癌细胞Hep3B的增殖情况;采用迁移侵袭实验（Transwell法）检测肝癌Hep3B细胞迁移和侵袭情况。生物信息学、双荧光素酶报告实验验证ST8SIA6-AS1与miR-142-3P的靶向关系。组间采用t检验,多组间采用单因素方差分析进行比较,相关性分析采用Spearman秩检验。结果 GEPIA结果显示ST8SIA6-AS1在肝癌组织中的表达明显高于正常组织。RT-qPCR结果显示ST8SIA6-AS1在HCC中的表达明显高于癌旁组织（0.778±0.363比1.951±0.575,t=11.370,P＆0.05）,差异有统计学意义。miR-142-3p在肝癌组织的表达量显著低于癌旁组织（0.881±0.374比0.371±0.164,t=9.395,P＆0.05）,差异有统计学意义。ST8SIA6-AS1在4种人HCC细胞株（HepG2、SMMC-7721、HCCLM3和Hep3B）的表达（3.84±0.27、5.81±0.60、4.47±0.55、5.94±0.69）明显高于正常肝细胞株L02（1.00±0.09,t=17.280,t=13.730,t=10.780,t=12.300,P＆0.05）,差异有统计学意义,ST8SIA6-AS1在敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞中的相对表达量低于对照组（0.26±0.04比1.00±0.01,t=9.423,P＆0.05）,差异有统计学意义。集落形成实验结果显示,敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞集落个数显著低于对照组[（32.60±6.70）个比（100.00±10.00）个,t=10.040,P＆0.05],差异有统计学意义;CCK-8实验中敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞72 h吸光度（A）值低于对照组[（0.71±0.06）%比（1.14±0.09）%,t=6.886,P＆0.05],差异有统计学意义。Transwell实验结果显示敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞垂直迁移率明显低于对照组[（53.38±6.49）%比（100.00±13.00）%,t=5.641,P＆0.05],差异有统计学意义。敲低ST8SIA6-AS1的Hep3B细胞的侵袭率低于对照组[（44.98±8.42）%比（100.00±10.00）%,t=7.485,P＆0.05],差异有统计学意义。双荧光素酶报告实验证实miR-142-3p过表达组明显低于对照组ST8SIA6-AS1-野生型（WT）细胞的荧光活性,ST8SIA6-AS1负向调控miR-142-3p的表达（0.42±0.05比1.00±0.09,t=9.757,P＆0.05）。干扰ST8SIA6-AS1的表达可对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭产生抑制作用,这种作用可通过沉默miR-142-3p发生逆转。结论 ST8SIA6-AS1可通过竞争性结合miR-142-3p在肝癌中发挥致癌作用。