前列腺癌微环境中癌相关成纤维细胞对细胞缝隙连接通讯的影响

摘要

目的观察前列腺癌微环境中癌相关成纤维细胞（CAFs）对细胞缝隙连接通讯（GJIC）的影响。方法取前列腺癌组织分离培养及鉴定CAFs, 分别将（0、0.25、0.50、0.75、1.00 g/L）浓度的CAFs培养液与处于对数生长期的前列腺癌PC-3细胞（购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心）共同培养, 采用荧光漂白恢复技术检测各组前列腺癌PC-3细胞缝隙连接（GJ）功能, 蛋白质印迹法（Western blot）检测各组细胞间隙连接蛋白43（Cx43）蛋白的表达。组间比较采用方差分析。结果成功分离培养CAFs, 前列腺癌PC-3细胞与不同浓度CAFs（0.00、0.25、0.50、0.75、1.00 g/L）共培养后, 细胞内荧光恢复程度逐渐减弱[（49.40±5.42）%、（45.36±3.23）%、（36.57±3.95）%、（29.18±5.51）%、（21.81±4.58）%, F=18.067, P＆0.05], 细胞GJIC水平逐渐减弱, 呈明显的剂量-效应依赖关系, 差异有统计学意义（t=1.109、3.313、4.531、6.734, P＆0.05）。同时, 各组CAFs中的Cx43蛋白的表达水平分别为0.723±0.065、0.641±0.084、0.425±0.078、0.314±0.067、0.267±0.059。随着共培养CAFs浓度的增加, 细胞内Cx43蛋白表达水平反而逐渐降低, 差异有统计学意义（t=1.337、5.084、7.589、8.997, P＆0.05）。结论 CAFs可下调前列腺癌PC-3细胞Cx43蛋白的表达水平, 抑制前列腺癌PC3细胞的细胞间缝隙连接功能。