过氧化物氧化还原酶蛋白1对胃癌细胞凋亡、自噬的影响及其机制

摘要

目的 探讨过氧化物氧化还原酶蛋白1（PRDX1）对人胃癌细胞株的影响及分子机制。方法 采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测PRDX1在人胃癌细胞株SGC7901、AGS及正常胃黏膜细胞GES-1的表达。合成针对PRDX1的小干扰RNA（siRNA）并制备慢病毒载体LV-PRDX1-siRNA,转染AGS细胞。噻唑蓝（MTT）法检测细胞的活性；流式细胞术（FCM）检测各组细胞凋亡率及线粒体膜电位；Real-time PCR及Western blot检测凋亡、自噬相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果 SGC7901、AGS细胞中PRDX1的mRNA（1.049±0.124、1.597±0.103）和蛋白（0.873±0.135、1.083±0.204）的相对表达水平明显高于GES-1细胞（mRNA：0.451±0.060、蛋白：0.305±0.022）,差异有统计学意义（F＝200.162、48.432,P＆0.01）。LV-PRDX1-siRNA转染AGS细胞后,细胞的凋亡率[48 h：（19.383±2.010）%,96 h：（26.875±4.337）%]明显高于空白对照组[48 h：（4.648±1.146）%、96 h：（8.849±1.361）%]、阴性病毒对照组[48 h：（5.539±0.778）%、96 h：（9.414±1.183）%,F＝206.260、85.681,P＆0.01],线粒体膜电位明显降低（F＝29.508,P＆0.01）。LV-PRDX1-siRNA转染后AGS细胞的凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、生存素（Survivin）表达降低,bcl-2相关X蛋白（bax）表达增高（F＝44.219、32.780、74.801,P＆0.01）,黑色素瘤凋亡抑制蛋白（Livin）变化不明显（F＝0.250,P＆0.05）；转染后自噬相关蛋白Beclin-1、LC-3Ⅱ/LC-3Ⅰ均明显增高（F＝30.332、24.260,P＆0.01）。结论 PRDX1在胃癌细胞中表达增高,抑制PRDX1表达能够通过调控凋亡和自噬相关基因而促进细胞凋亡及自噬。