应用羟基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺脂探讨新型免疫抑制剂J2作用机制

摘要

目的探讨基于CD4立体构型设计的新型免疫抑制剂（J2）在小鼠体内的免疫抑制作用以及其作用机制。方法将羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记的C57BL/6（H-2b）小鼠的淋巴细胞4×10~6～6×10~6经尾静脉注入经60钴照射（900拉德）后的DBA/2（H-2d）小鼠体内构建模型。将DBA/2小鼠随机分为5组,每组5只,模型建立后即刻腹腔注射J2,每天1次。对照组注射生理盐水、CsA组注射环孢素A（10mg/kg体重）;实验组J2A组（1mg/kg体重）、J2B组（4 mg/kg体重）、J2C组（8mg/kg体重）。给药3d后分组处死DBA/2小鼠取脾制备淋巴细胞,用CD3、CD4、CD8单抗分别标记受检T细胞,FACS流式细胞仪检测CD4+T细胞和CD8+T细胞在小鼠体内分裂增殖的情况,并检测CD4+T细胞的凋亡情况。结果CFSE标记C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞着染率大于99%。对照组分裂的CD4+ T细胞（75.4±1.58）%、分裂的CD8+ T细胞（83.48±1.25）%明显多于CsA组和实验组（P＜0.01）。J2B组和J2C组分裂的细胞数分别与CsA组比较差异无统计学意义（P＞0.05）,但J2A组多于CsA组（P＜0.05）。对照组CD4+ T细胞早期凋亡的比例（41.1±3.4）%明显高于其他各组（P＜0.01）。J2A组（35.6±4.1）%、J2B组（24.0±3.7）%和J2C组（13.6±2.3）%CD4+ T细胞早期凋亡的比例显著高于CsA组（7.4±1.9）%（P＜0.05）。结论J2可能抑制T细胞亚群CD4+ T细胞的活化,从而进一步抑制CD8+ T细胞的分裂增殖而具有免疫抑制作用。