抗人膀胱癌单克隆抗体Fab段与超抗原偶联蛋白的制备及T淋巴细胞刺激活性鉴定

摘要

目的制备超抗原与抗人膀胱癌单克隆抗体Fab偶联蛋白并鉴定其活性。方法以木瓜蛋白酶、BDI-1抗体比率1:100制备的Fab与SEA以5倍抗体过量用SPDP偶联;经surperdex-200柱纯化;SDS-PAGE确定纯度及相对分子质量;免疫组织化学法鉴定抗体活性;CCK-8、酶联免疫吸附试验（ELISA）法分析偶联蛋白促PBMC增殖、分泌活性。结果偶联蛋白、Fab、SEA洗脱出峰时间分别为16、27.5、30 min;SDS-PAGE电泳显示在250×10~3出现连续条带;免疫组织化学显示仅偶联蛋白组膀胱癌细胞膜呈阳性染色;CCK-8、ELISA法显示偶联蛋白促PBMC增殖指数PI介于1.1±0.1～2.3±0.1;PBMC上清白细胞介素（IL）-2、肿瘤坏死因子（TNF）-α、干扰素（IFN）-γ浓度分别为（136.1±12.8）、（140.8±21.8）、（207.7±10.5）ng/L,与SEA组差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论成功制备BDI-1Fab-SEA偶联蛋白,偶联蛋白仍保持良好的T细胞刺激活性和抗体活性。