脊索细胞促进骨髓间充质干细胞增殖及定向诱导分化的研究

摘要

目的分离兔髓核脊索细胞及骨髓间充质干细胞（MSCs）,通过共培养观察脊索细胞对MSCs增殖能力及细胞表型的影响。方法 4～6周龄新西兰兔4只,取胸腰段脊柱的髓核,用密度梯度离心法提取脊索细胞,同时取其股骨骨髓用Ficoll液分离得到MSCs,光镜观察脊索细胞和MSCs不同比例（1:2、1:1、2:1）共培养条件下细胞的生长,细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞增殖。脊索细胞和MSCs共培养（1:1）后行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原染色检测MSCs细胞表型的改变。对共培养后的MSCs进行相关基因表达的检测。结果光镜下观察原代脊索细胞呈圆形或椭圆形,胞体大,细胞增殖不明显。MSCs呈梭形贴壁生长,旋涡状排列。CCK-8检测发现脊索细胞/MSCs1:1组细胞增殖明显高于其余各组。甲苯胺蓝染色MSCs单独培养组呈阴性,共培养组呈阳性。Ⅱ型胶原染色MSCs单独培养组呈阴性,共培养组呈阳性。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测发现共培养组蛋白聚糖及Ⅱ型胶原的表达分别为脊索细胞的2.00、1.35倍,而单独培养的MSCs则表达阴性。结论在共培养条件下脊索细胞可以促进MSCs增殖,且细胞比例为1:1时更为显著;同时可以诱导其产生Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖,表现出类软骨细胞表型。