生长抑素受体-2基因逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞侵袭转移机制的研究

摘要

目的观察生长抑素受体-2（SSTR2）基因对肝癌细胞株MHCC--97H侵袭转移及上皮-间充质转化（EMT）特性的影响。方法构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,转染肝癌细胞株MHCC-97H,噻唑蓝（MTT）、免疫荧光检测转染效率。采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞（空白对照组）、转染3FLAG-puromycin-LV细胞（阴性对照组）和转染SSTR2-LV细胞（实验组）侵袭转移能力的强弱。镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达,实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测转染后细胞SSTR2的表达,Western blot检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）蛋白的表达。结果 SSTR2-LV可以有效转染肝癌细胞株MHCC-97H,稳定表达SSTR2的mRNA和蛋白。转染SSTR2-LV的肝癌细胞株MHCC-97H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制（P＜0.05）。镜下观察肝癌细胞株MHCC-97H转染SSTR2-LV后,由成纤维细胞样、排列分散,转变为细胞排列紧密如铺路石。免疫荧光染色结果可见肝癌细胞株MHCC-97H转染后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞质转移至细胞周边浓聚,而Vimentin的荧光强度较前下降。采用Western blot进行蛋白定量分析,转染后MHCC-97H细胞上皮表型标志性蛋白E-cadherin、β-连环蛋白（β-catenin）表达量增高,间质表型标志性蛋白N-cadherin、Vimentin表达量减少,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论转染再表达SSTR2MHCC-97H细胞可以增加上皮表型蛋白表达,减少间质表型蛋白,从而逆转肝癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱。